تست سمیت سنجی (تستMTT)

تست MTT چیست؟

تست mtt چیست، سنجش  MTT یا تست سمیت سنجی یک سنجش رنگ سنجی برای اندازه گیری فعالیت متابولیک سلولی است. این بر اساس توانایی آنزیم های اکسیدوردوکتاز سلولی وابسته به نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید فسفات (NADPH) در کاهش رنگ تترازولیوم MTT به فرمازان نامحلول آن است که رنگ بنفش دارد.آنزیم های اکسیدوردوکتاز سلولی وابسته به NAD(P)H ممکن است تحت شرایط تعریف شده، تعداد سلول های زنده موجود را منعکس کنند.

این آنزیم ها قادرند رنگ تترازولیوم MTT)3-(4،5-دی متیل تیازول-2-ایل)-2،5-دی فنیل تترازولیوم برومید را به فرمازان نامحلول آن که رنگ بنفش دارد، کاهش دهند. سایر رنگ‌های تترازولیوم نزدیک به هم از جمله XTT، MTS و WSTs، در ارتباط با گیرنده الکترون میانی، متوسولفات 1-متوکسی فنازین (PMS) استفاده می‌شوند. با WST-1، که غیرقابل نفوذ سلول است، فرایند کاهش در خارج از سلول از طریق انتقال الکترون غشای پلاسمایی رخ می دهد. با این حال، این توضیح به طور سنتی فرض شده در حال حاضر مورد ادعا قرار می گیرد، زیرا شواهدی نیز مبنی بر کاهش MTT به فرمازان در ساختارهای سلولی لیپیدی بدون دخالت آشکار اکسیدوردوکتازها یافت شده است.

تجهیزات لازم برای آنالیز MTT

• الایزا ریدر
• هود بیولوژیکی
• انکوباتور CO2
• پلیت 96 خانه
•  سمپلر
•  سلول
•  نمونه

نکات مهم ولازم برای انجام تست MTT

• تعداد و تراکم سلول
• زمان انکوباسیون MTT
• غلظت MTT
• لیز سلولی و سکرتوم
• آلودگی
• محیط کشت

چرا تست سمیت سلولی ترجیح داده می شود؟

از مزایای تست سمیت سلولی می توان به سهولت و سرعت عملکرد، تکرارپذیری نتایج و همبستگی بالینی مشاهده شده بین تست های in vitro و in vivo اشاره کرد.

آیا تست MTT کمی است یا کیفی؟

پیوست C ISO 10993-5 به تست MTT به عنوان یک روش سمیت سلولی کمی تجویز شده اشاره می کند. تستMTT مزایای متعددی نسبت به روش‌های سنتی سمیت سلولی کیفی دارد.

چگونه تست سمیت سنجی را انجام می دهید؟

پروتکل MTT

• محیط های کشت سلولی را دور بریزید. …
• 50 میکرولیتر محیط بدون سرم و 50 میکرولیتر محلول MTT را در هر چاهک اضافه کنید.
• پلیت را به مدت 3 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
• پس از انکوباسیون، 150 میکرولیتر حلال MTT را به هر چاهک اضافه کنید.
• بشقاب را در فویل بپیچید و به مدت 15 دقیقه روی شیکر اوربیتال تکان دهید. …
• جذب را در OD=590 نانومتر بخوانید.

تست MTT چگونه داده ها را تجزیه و تحلیل می کند؟

داده ها با ترسیم تعداد سلول در مقابل جذب تجزیه و تحلیل می شوند و امکان کمی سازی تغییرات در تکثیر سلولی را فراهم می کنند. سرعت کاهش تترازولیوم متناسب با سرعت تکثیر سلولی است

محدودیت  سنجش MTT چیست؟

محدودیت های چند پلکسی

با روش تست سمیت سلولی، افزودن حلال برای حل کردن کریستال‌های فورمازان، معماری سلولی و احتمالاً بیشتر فعالیت آنزیمی را از بین می‌برد و توانایی مالتیپلکس کردن تست MTT را با روش دیگری محدود می‌کند، مگر اینکه پروتکل سنجش دیگر قبل از افزودن محلول انحلال‌سازی باشد.

بهترین حلال برای تست سمیت سنجی کدام است؟

نتایج نشان داد که DMSO و PropOH حلال‌های بهتری برای سنجش زنده‌مانی سلول‌های MTT هستند تا برای سلول‌های NIH/3T3 تحت چگالی 10⁴×3.125/cm2 در یک پلیت 96 خانه استفاده شوند.

خدمات تست MTT که در مجموعه تیشوهاب انجام می گیرد.

• بررسی زنده مانی سلولی
• ارزیابی سمیت داربست
• ارزیابی سمیت هیدروژل
• ارزیابی سمیت پلیمرهای مصنوعی
• ارزیابی سمیت پلیمرهای طبیعی
• ارزیابی سمیت نانوذرات
• بررسی زنده مانی سلولی 24 ساعت
• بررسی زنده مانی سلولی 48 ساعت
• بررسی زنده مانی سلولی 72 ساعت
• جهت اطلاعات بیشتر تماس بگیرید.